Discos de Oxidase

Postado por: Êxodo Cientifica - 3 anos

Certas bactérias possuem a citocromo oxidase ou indofenol oxidase (uma hemoproteína contendo ferro), que catalisa o transporte de elétrons de compostos doadores (NADH) para aceitadores de elétrons (normalmente o oxigênio).

No teste de oxidase, um corante incolor como o  N, N-dimetil-p-fenilenodiamina tem a função de servir como um aceptor de elétrons artificial para a enzima oxidase.

O corante é oxidado para formar o azul de indofenol (indophenol blue), que é um composto colorido.

O teste da oxidase é útil na caracterização inicial de bactérias aeróbias gram-negativas dos gêneros Aeromonas, Plesiomonas, Pseudomonas, Campylobacter e Pasteurella.

Os discos de oxidase são discos de papel de filtro estéreis impregnados com oxalato de N, N-dimetil-p-fenilenodiamina, ácido ascórbico e a-naftol. Esses discos superam a necessidade de preparação diária de reagente fresco para averiguação da oxidase.

Inicialmente o teste de oxidase foi introduzido por Gordon e McLeod (1) para identificar gonococos com base na capacidade de certas bactérias em produzir azul de indofenol a partir da oxidação de dimetil-p-fenilenodiamina e a-naftol.  Gaby e Hadley posteriormente introduziram um método mais sensível usando N, Oxalato de N-dimetil-p-fenilenodiamina em que todos os estafilococos eram negativos para a oxidase.

O tempo de reação nos discos de oxidase de marca Himedia é de 5-10segundos! CADA VIAL CONTEM 50 DISCOS.

FICA A DICA!

1. NÃO USAR ALÇAS OU AGULHAS DE INOCULAÇÃO FEITAS DE AÇO INOXIDAVEL OU NÍQUEL CROMO, uma vez que uma reação falso positiva pode resultar de produtos de oxidação de superfície formado durante a esterilização por chama destes materiais.

1. O uso de colônias provenientes do crescimento de meios contendo corantes não é adequado para o teste. Recomenda-se passar para um meio não seletivo livre de corantes (TSA, Luria Bertani (LB), Nutriente Agar, BHI ágar entre outros)

1. O tempo é crítico (5-10 segundos) para a interpretação dos resultados.

1. Realize o teste de oxidase em todos os bacilos gram-negativos.

1. A produção de citocromo oxidase pode ser inibida pela produção de ácido. Reações falsas negativas podem ser exibidas por Vibrio, Aeromonas e Plesiomonas quando cultivadas num meio contendo carboidratos fermentáveis, (exemplo Agar MacConkey. Este possui Lactose em sua composição). Colônias retiradas de meios contendo nitrato podem dar resultados não confiáveis. A perda de atividade do reagente oxidase é causada por auto oxidação, que pode ser evitada com a adição de ácido ascórbico 0,1%.